在上一篇博文中《使用Autodock Vina进行分子对接》中我们介绍使用Vina进行单分子虚拟筛选的过程。现在，我们介绍利用AWS 的pcluster工具进行大规模分子虚拟筛选。

如果你需要自己使用AWS的资源配置一个超算集群，那么重头阅读到尾。
如果你已经有了超算资源（slurm调度），例如：并行科技，超算中心，那么可以直接跳到第三部分。

AWS pcluster+ Vina 进行百万级分子库虚拟筛选的整体架构如下：

一、关于AWS pcluster

AWS pcluster的全程是Amazon ParallelCluster，是Amazon支持的开源集群管理工具，可在Amazon Web Services云中部署和管理高性能计算 (HPC) 集群。它会根据配置自动启动所需的计算资源和共享文件系统。支持Amazon Batch和Slurm等调度程序并充分利用云端的弹性和扩展性，用户只需为实际使用的计算和存储等资源付费。

我们这里使用的是Slurm调度程序。

二、配置pcluster集群环境

2.1 创建pcluster虚拟环境

创建pcluster conda环境。

$ conda create -n Pcluster python=3.8

激活pcluster环境，安装AWS pcluster, Node.js

$ conda activate Pcluster
$ python3 -m pip install --upgrade "aws-parallelcluster<3.0" #AWS 中国区不支持pcluster3.0版本
$ curl -o- https://raw.githubusercontent.com/nvm-sh/nvm/v0.38.0/install.sh | bash ~/.nvm/nvm.sh
$ nvm install node
$ node --version

注意，我这里的pcluster是2.8版本。不同版本会有差异。

2.2 配置系统环境，创建文件系统

我们使用Amazon FSx for Lustre作为集群的文件系统。创建模式参考文档：https://aws.amazon.com/cn/fsx/lustre/getting-started/?nc=sn&loc=4
根据向导创建一个1.2TiB, 60MiB/s吞吐的SSD存储类型的文件系统。创建以后会生成一个FSx的id，保留这个id即可。

2.3 集群的配置文件

集群配置文件记录了集群所需的信息，包括：主节点的实例类型、计算节点实例类型，计算节点最大容量等。下面是一个具体的例子，改配置文件名为Pcluster_create_config_Vina

由于大规模虚拟筛选是一个耗时耗资源的事情，我们往往会使用AWS的spot模式（空余资源）启动计算节点，可以节省大量的计算费用。spot模式最大的问题是，计算节点会被AWS系统自动回收，因此，在虚拟筛选过程会出现job被重复提交的情况。

我试过500以上的，都出现了计算节点job频繁重启的问题，特别是在m5.large等实例，现象更为严重。而vcpu数量较多的机型则比较少见重启情况，因为我们选择72核、96核的18xlarge和24xlarge机型。

Pcluster_create_config_Vina文件具体内容如下：

[aws]
aws_region_name = cn-northwest-1 #aws西北宁夏区

[global]
cluster_template = VinaBatch #集群名字
update_check = true
sanity_check = true

[cluster Vina_Batch]
custom_ami = ami-0c8475cadd4209d99 #启动集群需要的ami，不同可用区ami不一样，请联系AWS的售后团队。
key_name = AIDrugs #秘钥名称
scheduler = slurm #调度器
master_instance_type = i3en.large #主节点类型
base_os = ubuntu1804 #主节点类型
vpc_settings = aidrugsvpc #vpc
queue_settings=c5,m5,spe,vita,chem #计算资源队列, 我配置了多个队列，vita,chem等都用不到的
cw_log_settings = hpc-cw
scaling_settings = hpc-asg
fsx_settings = fs #共享文件系统

[queue spe] #spe队列，每一个队列可以有三种实例机型
compute_resource_settings = c5d.18xlarge, c5a.24xlarge, c5.18xlarge
compute_type = spot #调用实例模式为spot，比较省钱

[compute_resource c5d.18xlarge] #计算节点1
instance_type = c5d.18xlarge
max_count = 60

[compute_resource c5a.24xlarge] #计算节点2
instance_type = c5a.12xlarge
max_count = 30

[compute_resource c5.18xlarge] #计算节点3
instance_type = c5.18xlarge
max_count = 60

[queue chem]
compute_resource_settings = m5.12xlarge, m5a.16xlarge, c5a.16xlarge
compute_type = spot

[compute_resource m5a.16xlarge]
instance_type = m5a.16xlarge
max_count = 60

[compute_resource c5a.16xlarge]
instance_type = c5a.16xlarge
max_count = 60

[compute_resource m5.12xlarge]
instance_type = m5.12xlarge
max_count = 90

[compute_resource m5.xlarge]
instance_type = m5.xlarge
max_count = 1000

[queue c5]
compute_resource_settings = c5.large
compute_type = spot

[compute_resource c5.large]
instance_type = c5.large
max_count = 10

[queue m5]
compute_resource_settings = m5.large
compute_type = spot

[compute_resource m5.large]
instance_type = m5.large
max_count = 1000

[aliases]
ssh = ssh {CFN_USER}@{MASTER_IP} {ARGS}

[vpc aidrugsvpc]
vpc_id = vpc-057ec8549db8a5f
master_subnet_id = subnet-03f298e4b1365c3
compute_subnet_id = subnet-03f298a3e4365c3

[fsx fs] 
shared_dir = /data #文件系统的挂载目录
fsx_fs_id = fs-0658c26308ac75936 #2.2配置文件系统fsx的id

2.4 启动集群

通过Pcluster_create_config_Vina配置文件创建VinaBatch集群：

$ pclusterr create VinaBatch -c Pcluster_create_config_Vina

启动集群后，通过ssh等方法链接进入主节点（头结点），修改集群参数，增加任务数上限为50万，默认为1W是不够的。

进入主节点：

 $ pcluster ssh VinaBatch -i AIDrugs.perm #进入主节点

$ sudo vim /opt/slurm/etc/slurm.conf

添加MaxJobCount=500000至末行，重启slurmctld服务：

$ sudo systemctl restart slurmctld

在主节点可以通过sinfo或者squeue查看节点或者任务状态。

$ sinfo

可以看到里面有5个队列，每个队列里面有数量不等的计算资源。这里我建立了一个很大的资源池，想用多少就用多少，具体可以根据项目时间和预算情况进行分配。

squeue

现在没有任务在跑，没有job自然为空。

顺路插一句，自己搭建集群的好处是，想拉5W vcpu的时候，不需要和超算中心那边商量，想起机子就起机子，只要你有钱，有预算。另外，由于一些二级供应商，往往不会开放root权限，所以安装软件也不是随心所欲的。另外，就是保密性问题，供应商有root权限。总之，好处多多，但是更复杂了，这种技术架构适合拥有云服务维护团队的公司。

2.5 安装Vina及其相关环境

安装方法可以参考之前的那一篇博客《使用Autodock Vina进行分子对接》，这里就不在复述。

要安装的软件包括：vina, obabel， MGLTools。注意，我这里的安装目录全部都是挂载盘/data。

三、利用集群+Vina进行百万级分子的虚拟筛选

任务主要涉及到以下工作流程：

1. 分子库拆分：我们将下载的比较大的的分子库拆分成独立的分子文件，这里一个分子库可能可能包含百万级别的分子数量。
2. 分子构象生成：通过Open Babel工具为每个分子生成三维构象（sdf格式）。
3. 格式转换：通过工具MGLTools将每个分子的三维构象从sdf转换为pdbqt格式用于后续分子对接。
4. AutoDock Vina分子对接: 一个分子对接任务的输入为分子的某一个三维构象（pdbqt格式），pdbqt格式的受体蛋白文件和靶点对接坐标信息（grid space）。

3.1 配体预处理

目的是在将配体文件改为适合vina的pdbqt文件，同时生成保存对接位置的对接配置文件。这里我们已1a3w.pdb为例，在1a3w蛋白的变构位置(A链1007号小分子)进行进行大规模的虚拟筛选，位置如下图中紫色小分子位置。

先利用pymol文件对配体pdb进行预处理，包括删除水分子，加氢，定位对接位置等。

#以下命令均在pymol cmd中执行
fetch 1a3w #加载配体
remove chain B #删除B链
remove resn HOH #删除水分子
h_add elem O or elem N #添加H原子
select mol, chain A and res 1007 3#选中小分子
select protein, 1a3w and not mol #选中配体，不包含小分子
save 1a3w-accptor.pdb, protein #保存配体

同样获得小分子中心位置（需要对接位置）坐标如下，对接范围15A， 保存在config.txt，内容如下：

center_x = 35.371
center_y = 17.826
center_z = 40.325
size_x = 20.0
size_y = 20.0
size_z = 20.0

整个对接项目的文件结构均在spe文件夹下。*.sh文件是相关的执行脚本，acceptor文件下是上述的1a3w-accptor.pdb和config.txt文件。

spe文件目录如下：

其中，*.sh就是我们要用到的shell脚本。然后Specs.sdf是小分子库，这里仅仅是一个示例，来源于陶署，具体可以替换成任何分子库。分子数量可以500W都没问题。

切换到acceptor目录下，使用MGLTools将1a3w-accptor.pdb转为Vina适用的pdbqt格式， 即1a3w-accptor.pdbqt。可参考上一篇博客《使用Autodock Vina进行分子对接》。

方法如下：

$ cd acceptor
$ pythonsh /data/mgltools_x86_64Linux2_1.5.7/MGLToolsPckgs/AutoDockTools/Utilities24/prepare_receptor4.py -r 1a3w-accptor.pdb
$ ls

至此，配体已经准备完成。

小分子的准备包括三个步骤：

3.2 小分子拆分

运行1-Prepare_sdf.sh：创建sdf 3D_mol2 3D_sdf split_txt pdbqt log同时使用pcluster的m5队列将所有sdf拆成单个小分子的sdf文件放置在sdf文件夹内。
1-Prepare_sdf.sh内容如下：

#! /bin/bash

echo "
Create a file directory, split the sdf file into a single molecule sdf files"
mkdir sdf 3D_mol2 3D_sdf split_txt pdbqt log

echo "Slipt the datasets which are in ./ with sdf filetype
into sdf file for each moleculars in sdf folder"

source /home/ubuntu/anaconda3/etc/profile.d/conda.sh
conda activate Vina

for f in *.sdf
 do
 b=`basename $f .sdf`
 sbatch -c 1 -p m5 --output ./log/$f.out  --job-name Splitsdf --wrap "srun bash Prepare_sdf.sh $f $b"

done

Prepare_sdf.sh使用obabel将sdf中的小分子拆分，内容如下：

#! /bin/bash
obabel -isdf $1 -osdf -O /sdf/$2_.sdf -p 7.4 -m

bash 1-Prepare_sdf.sh后，可以通过squeue查看队列情况：


看到节点处于“CF”状态，这是正在构建计算节点的过程中，等待几分钟后，在使用squeue可以看到计算节点处于R状态（正在运行任务中）。

由于当前目录下只有一个sdf文件（分子库），所以只提交一个job，id是154021，如果有多个sdf文件，则会提交相应数量的job。

ls查看当前目录，可以看到创建了一些相应的工作目录。

通过以下命令可以查看sdf生成文件数量。

$ cd sdf
$ ls -l | wc -l 

经过简单30秒，其实还没运行完，就生成了7W+的分子。

3.3 分子构象生成