导语

前述，师弟 Chuhao Li 用 Python 开发了第一个 TBtools CLI Program Wrapper Creator 插件。插件的实用性和制作的精细程度出乎意料。感慨之余，我邀请他给大伙分享一下制作经验（因为我完全不懂 Python，而我知道 Python 是现在绝大多数朋友最喜欢用的语言）。收到推文，发现非常详细，且内容使用。尤为难得，还直接拓展了 TBtools 的一个功能痛点（没有批量化反向互补功能！）。Chuhao 开发的这个插件，直接填补了这个缺憾，同时还做了多线程加速，我用了下，非常方便，非常快！现在插件已经上传到商店，感兴趣的朋友可下载使用。另，欢迎大伙学习这篇博文后，也一起来开发插件，贡献力量，一起减除更多人的生信数据分析负担。

前言

相信很多学习生物信息学的人都会学习python。你可能遇到过这样的情况：

在一个风和日丽的早上，你耗尽洪荒之力，写好了一个“反向互补”命令行工具，然后很激动地把代码发到群里面，分享给实验室其他人用。

小伙伴就会跟你说：这个脚本要怎么用呀？然后，你就会解释道：首先，安装一个python，然后这样打开终端，然后这样输入参数……。

小伙伴说：“嗯，我先试一下”。然后一顿操作，在不知名网站上下载了个“python”安装包，把python安装好，还付送了一堆4XX9小游戏之类的软件。

如无意外，过一会，小伙伴就会跑过来问你，“我输入命令，怎么报错了”？

你仔细地检查，发现如下问题：

• 安装了python2而不是python3
• 那行命令没有在特定工作目录
• 命令的某个单词少了一个字母
• 某两个参数之间没有空格

一顿操作过后，问题解决了，你还很详细地给小伙伴解释了其中的原理。能帮助到实验室的小伙伴，你很开心，回到工位上，准备迎接一天的工作。

然后，噩梦来了。另外一个小伙伴又来问你同样的问题……

这时候，我会告诉你：用pyinstaller打包你的工具，然后用TBtools的CLI Program Wrapper Creator来快速构建一个图形界面插件。

5分钟把插件打包好，直接把插件扔给小伙伴们，在群里说：“我项目需求，顺手写了个工具，有需要的拿去。” 然后潇洒离去。

下面我将用实际例子给大家介绍，如何操作。

python反向互补脚本

下面的脚本实现了单条序列的反向互补。为了减少代码量，我使用了biopython来进行fasta序列的读写和操作。接下来，我要把这个工具打包成TBtools插件。

import sys
from Bio import SeqIO

infile = sys.argv[1]
outfile = sys.argv[2]

seq = SeqIO.read(infile, 'fasta')
seq.seq = seq.seq.reverse_complement()

with open(outfile, "w") as f:
    SeqIO.write(seq, f, "fasta")

安装pyinstaller

假设你已经安装好了python，进入cmd或者powershell，输入以下命令，即可安装pyinstaller以及脚本所依赖的biopython：

注意：如果你的python环境中已经安装了很多别的包，那么pyinstaller打包的时候会把一些不必要的包打包进来。这种情况下，建议使用virtualenv来新建一个新的环境（如果你是刚刚才安装的python，那就没必要做这一步了）：

py.exe -m pip install virtualenv

py.exe -m virtualenv my_env

.\my_env\Scripts\activate # 激活环境。激活后可以看到命令行左边多了(my_env)。

# 如果激活失败，那就尝试不要用powershell，转用cmd（新建一个cmd窗口或者在powershell中直接输入cmd即可）。

环境激活之后，安装所需的软件。这里除了pyinstaller，还安装了biopython，这是这个脚本中用到的。

py.exe -m pip install pyinstaller biopython

一般来说，安装完后，在cmd或者powershell下运行下面的命令可以打印出帮助信息。

pyinstaller -h

如果不行，那就试试下面的（注意大小写）：

py.exe -m PyInstaller -h

编写脚本需要注意的问题

参数传递

可以使用位置参数（参数前不带“-”的）和长参数（参数前带“--”的）。如果只有位置参数，就直接用sys.argv；如果要用到长参数，推荐使用argparse。

值得注意的是，当argparse和multiprocessing一起使用的时候，需要使用parser.parse_know_args()，而不能直接使用parser.parse_args()，否则传递参数的时候会出错。

多线程

使用到多线程时，主程序需要用if __name__ == '__main__':保护起来。下面一行紧接着freeze_support()。

调用其他工具

假如我的程序需要调用其他二进制文件，只需要把exe文件放在与脚本同一个目录下即可。TBtools运行脚本的时候，会自动把脚本所在目录添加到环境变量，于是在脚本中可以不需要指定二进制文件所在的路径。

调用外部命令，注意给输入、输入文件路径加引号，防止输入文件路径中有空格的问题。假设输入文件路径为infile = "C:\Use r\input.fasta",中间有个空格。那么，如果使用os.system(f'tool_name.exe {infile}')来调用就会有问题。需要在infile两边加上引号：os.system(f'tool_name.exe "{infile}"')。

值得注意的是，如果使用的是blastn.exe等TBtools已经有的二进制文件，则可以直接调用，不必打包到插件当中。

代码修改

下面的代码，在原来的基础上添加了多线程和使用argparse来解析参数。请注意注释部分。

import argparse
from multiprocessing import Pool, freeze_support
from Bio import SeqIO

def rc(seq):
    seq.seq = seq.seq.reverse_complement()
    return seq

if __name__ == '__main__': # 使用到多线程时，这一行必须加。下面一行紧接着“freeze_support()”
    freeze_support() 
    
    parser = argparse.ArgumentParser()
    parser.description = "多线程反向互补"
    parser.add_argument("--threads", default=1, type=int, help="Number of threads")
    parser.add_argument("input", help="Input fasta file")
    parser.add_argument("output", help="Output fasta file")
    
    args, unparsed = parser.parse_known_args() 
    # argparse和多线程搭配使用的时候，这里需要使用parse_know_args()，
    # 而不能直接使用parse_args()，否则传递参数的时候会出错。

    seqs = SeqIO.parse(args.input, 'fasta')
    with Pool(processes=args.threads) as pool:
        seqs_rc = pool.map(rc, seqs)
        pool.close()
        pool.join()

    with open(args.output, "w") as f:
        for seq in seqs_rc:
            SeqIO.write(seq, f, "fasta")

打包

具体操作

在py脚本所在目录，按住“shift”键，然后右键点击文件浏览器的空白处，点击“在此处打开命令窗口”，就能进入终端，并自动切换工作目录为当前目录。

运行以下命令，即可打包：

pyinstaller -D .\multiprocess_rc.py

# 如果不行，就用下面的：
# py.exe -m PyInstaller -D .\multiprocess_rc.py

打包完成，可以看到当前目录多了两个文件夹和一个文件：

其中dist文件夹里面就是我们打包好的工具。里面长这样。里面的multiprocess_rc.exe就是程序的入口，其他文件是该程序依赖的资源，必须和主程序放在同一个目录。：

命令解析

在这个行命令中，我传递了-D和.\multiprocess_rc.py两个参数给pyinstaller。

1. -D 参数是指要打包成一个文件夹，把所有依赖的dll等文件放在同一个文件夹中。另外一种方式是-F，指定-F参数可以把全部文件打包成单个的exe文件。虽然-F参数打包出来的文件看上去很干净，其实在实际运行的时候还是会把exe文件里面的东西释放到一个临时文件夹中，然后再运行，而且会引入一些额外的bug。所以，我推荐使用-D参数。

2. .\multiprocess_rc.py 就是脚本的主程序。如果有多个模块，只需要输入主程序即可。打包工具会自动识别主程序中有import到的其他脚本，一起打包进去。

其他实用参数

如果你需要调用其他二进制文件，比如说tool.exe。你可以把tool.exe放在和脚本同一目录，然后打包的时候增加以下参数：--add-data "tool.exe;tool.exe"。这样就可以把tool.exe一起放在打包好的文件夹中了。当然你也可以手动复制过去，不过如果涉及到多次打包，就会麻烦一丢丢。

输出文件

• dist 目录：里面有打包好的软件。

• build 目录：打包过程中生成的临时文件，可以删掉。

• *.spec 文件：打包相关的配置文件。如果重复打包，可以直接把这个文件代替掉脚本名字，传递给pyinstaller，就不用再写那些参数了。

小技巧

常常会遇到需要打包、测试多次的时候。这时候，把打包和测试相关的命令写入到一个.bat文件中是比较方便的。这样直接双击.bat文件就可以重新打包，无需重新输入命令。

关于pyinstaller的更多信息，请参考：

• pyinstaller官网
• pyinstaller疑难问题解决

测试pyinstaller打包结果

进入dist/multiprocess_rc/目录，打开cmd，执行以下命令：

.\multiprocess_rc.exe --threads 4 .\input.fasta output.fasta

可以得到输出结果，代表运行成功。检查文件结果，也确实是反向互补了：

input.fasta:

>test
ATCGGGTTCCAA
>test1
ATCGGGTTCCAA
>test2
ATCGGGTTCCAA
>test3
ATCGGGTTCCAA
>test4
ATCGGGTTCCAA

output.fasta:

>test
TTGGAACCCGAT
>test1
TTGGAACCCGAT
>test2
TTGGAACCCGAT
>test3
TTGGAACCCGAT
>test4
TTGGAACCCGAT

打包TBtools插件

在插件商店安装好CLI Program Wrapper Creator后，从Tbtools的菜单栏Others > Plugin中即可看到。点击进去，参照下方的设置：

配置完成，点击“Refresh”就可以刷新界面。还可以直接在界面中运行程序，非常方便。如果配置到一半要去吃饭，可以按下方的“Save Config”暂时把界面设置保存为文件，下次可以直接用“Load Config”来加载，省去很多时间。

测试完成，点击右下角的“Export Plugin”，即可导出插件。导出的文件实际上是一个zip压缩文件。建议导出的时候不要加任何后缀，这样后面安装插件时，菜单栏上名字就会带有后缀。导出之后，再重新添加“.zip”后缀。

导出后，进入Others > Install Plugin 安装插件，然后就可以使用了。

把序列粘到Input输入框，点击开始，就可以看到下方的反向互补序列了！

这里我忽略了很多UI设计界面使用的细节，详情可以回头看看公众号前几天的推文，有CJ的详细教程。

总结

把经常要做的、重复性的东西简单化、流程化、自动化，或许可以让大家把更多的时间投入到科学问题的研究中。